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李 记 生 物 生 物 试 剂 盒 产 品 公 司 “ 和 元 李 记 ” 由 和 元 生 物 ( 股 票 代 码 ： 6 8 8 2 3 8 ) 和 李 记 生 物 合 资 成 立 的 ， 主 营 “ 李 记 生 物 ” “ L i f e i l a b ” 试 剂 品 牌 选 择 语 言 ： 中 文 中 文 E n g l i s h 和 元 李 记 ( 上 海 ) 生 物 技 术 有 限 公 司 首 页 产 品 中 心 细 胞 生 物 学 动 物 细 胞 培 养 其 他 血 液 制 品 常 用 培 养 基 平 衡 盐 溶 液 细 胞 增 殖 与 毒 性 转 染 试 剂 细 胞 凋 亡 支 原 体 检 测 与 祛 除 细 胞 污 染 预 防 与 清 除 细 胞 分 离 活 体 成 像 细 胞 染 色 报 告 基 因 细 胞 株 细 胞 组 织 运 输 保 存 蛋 白 与 免 疫 免 疫 磁 珠 免 疫 凝 胶 蛋 白 制 备 蛋 白 定 量 蛋 白 电 泳 转 膜 d o i : 1 0 . 3 3 9 0 / i j m s 1 7 0 4 0 4 9 9 结 果 展 示   1 . 差 异 m i R N A 上 下 调 统 计 分 析 差 异 基 因 上 下 调 频 数 统 计 用 于 判 断 不 同 实 验 条 件 下 差 异 表 达 m i R N A 的 个 数 。 其 中 横 坐 标 表 示 比 较 组 信 息 ， 纵 坐 标 表 示 上 下 调 m i R N A 的 数 目 ， 红 色 代 表 上 调 m i R N A ， 蓝 色 代 表 下 调 m i R N A ， 其 中 数 字 代 表 上 下 调 m i R N A 的 数 目 。   2 . 差 异 m i R N A 聚 类 分 析 差 异 m i R N A 聚 类 分 析 用 于 判 断 m i R N A 在 不 同 实 验 条 件 下 调 控 的 聚 类 模 式 。 根 据 样 品 m i R N A 表 达 谱 的 相 近 程 度 ， 将 m i R N A 进 行 聚 类 分 析 ， 直 观 地 展 示 m i R N A 在 不 同 样 品 （ 或 是 不 同 处 理 ） 中 的 表 达 情 况 ， 由 此 获 取 生 物 学 相 关 信 息 。 不 同 的 颜 色 表 示 不 同 的 m i R N A 表 达 水 平 ， 颜 色 由 蓝 色 经 由 白 色 至 红 色 表 示 表 达 量 从 低 到 高 。 红 色 表 示 高 表 达 基 因 ， 深 蓝 色 表 示 低 表 达 基 因 。   3 . 差 异 m i R N A 韦 恩 图 通 过 不 同 比 较 组 之 间 差 异 基 因 韦 恩 图 可 以 直 观 地 显 示 出 不 同 比 较 组 之 间 共 同 的 和 特 有 的 差 异 表 达 m i R N A 的 个 数 ， 差 异 基 因 韦 恩 图 具 有 明 显 的 生 物 学 意 义 ， 比 如 是 相 同 对 照 不 同 处 理 的 实 验 设 计 情 况 ， 可 以 将 不 同 处 理 下 的 差 异 基 因 进 行 比 较 。   4 . G O 富 集 性 柱 状 图 m i R N A 靶 基 因 的 G O 富 集 柱 状 图 ： 用 于 反 映 在 生 物 过 程 ( b i o l o g i c a l p r o c e s s ) 、 细 胞 组 分 ( c e l l u l a r c o m p o n e n t ) 和 分 子 功 能 ( m o l e c u l a r f u n c t i o n ) 富 集 的 G O   t e r m 上 差 异 基 因 的 个 数 分 布 情 况 。   5 . G O 富 集 性 散 点 图 对 差 异 m i R N A 进 行 G O 富 集 分 析 并 以 散 点 图 展 示 ， R i c h f a c t o r 表 示 位 于 该 G O 的 差 异 基 因 个 数 / 位 于 该 G O 的 总 基 因 数 ， P 值 越 小 ， G O 富 集 程 度 越 高 。 常 见 问 题   1 . m i R N A 命 名 规 则 是 怎 样 的 ？ 关 于 m i R N A 命 名 ， 是 根 据 m i R B a s e 的 命 名 规 则 ： 物 种 拉 丁 名 3 字 母 缩 写 m i R / M I R 编 号 （ 植 物 ） ， m i R 表 示 的 是 m i c r o R N A 成 熟 体 ， 植 物 的 前 体 使 用 M I R 。 参 见 m i R B a s e 官 网 : 目 前 已 经 不 再 使 用 * 来 标 记 m i c r o R N A 与 其 发 夹 前 体 互 补 配 对 位 置 的 互 补 序 列 ， 而 是 使 用 “ 3 p ” 与 “ 5 p ” 作 为 区 分 这 两 条 序 列 的 后 缀 替 代 旧 的 的 命 名 法 。 具 体 参 考 1 7 . 0 版 本 出 来 时 ， m i R b a s e 数 据 库 的 b l o g 文 章 ： h t t p : / / w w w . m i r b a s e . o r g / b l o g / 2 0 1 1 / 0 4 / m i r b a s e 1 7 r e l e a s e d /   2 . 如 何 筛 选 差 异 基 因 ？ 可 以 在 筛 选 的 时 候 可 能 需 要 参 考 该 参 数 ， 一 般 如 果 专 注 于 发 现 ， 那 么 全 部 保 留 ， 如 果 专 注 于 差 异 表 达 ， 可 以 仅 保 留 h i g h 和 m i d d l e 拷 贝 的 。 l o g 2 ( T r e a t / C o n t r o l ) > 0 表 示 上 调 ， 1 表 示 上 调 2 倍 ， 0 表 示 上 调 ， 1 表 示 上 调 2 倍 ， 了 解 详 情 i T R A Q 蛋 白 质 组 定 量 i T R A Q ( I s o b a r i c T a g s f o r R e l a t i v e a n d A b s o l u t e Q u a n t i t a t i o n ) 技 术 是 A B I 公 司 推 出 的 一 项 新 的 体 外 同 位 素 标 记 技 术 。 使 用 该 技 术 可 以 对 一 个 基 因 组 表 达 的 全 部 蛋 白 质 或 一 个 复 杂 的 混 合 体 系 中 的 所 有 蛋 白 质 进 行 精 确 定 量 和 鉴 定 。 寻 找 差 异 表 达 蛋 白 ， 并 揭 示 其 细 胞 生 理 病 理 功 能 。 联 川 生 物 依 托 先 进 的 蛋 白 质 谱 分 析 平 台 、 强 大 的 信 息 分 析 和 数 据 处 理 能 力 ， 为 用 户 提 供 高 效 的 蛋 白 质 组 鉴 定 与 定 量 分 析 服 务 。 技 术 优 势   通 量 高 ： 一 次 实 验 即 可 对 数 千 种 蛋 白 进 行 定 量 分 析 ， 并 且 最 多 可 同 时 对 8 份 样 本 进 行 定 量 分 析 ， 通 量 远 胜 于 传 统 的 双 向 电 泳 。 结 果 可 靠 ： 蛋 白 分 析 的 灵 敏 度 ， 特 异 性 及 重 复 性 远 高 于 双 向 电 泳 ， 并 且 定 性 与 定 量 分 析 同 步 完 成 ， 确 定 结 果 准 确 性 定 性 。 覆 盖 广 泛 ： 鉴 定 与 定 量 分 析 样 本 中 表 达 的 所 有 已 知 蛋 白 ， 包 括 高 分 子 量 蛋 白 、 酸 碱 性 蛋 白 、 膜 蛋 白 和 不 溶 性 蛋 白 等 。 支 持 关 联 分 析 ： 综 合 上 游 转 录 组 等 实 验 数 据 ， 提 供 多 组 学 关 联 分 析 。 技 术 路 线 蛋 白 质 样 品 提 取 i T R A Q 标 记 液 相 色 谱 分 离 L C M S / M S 信 息 分 析 分 析 内 容 1 . 数 据 产 出 统 计 与 质 控 2 . 蛋 白 质 鉴 定 分 析 3 . 蛋 白 质 定 量 分 析 4 . 蛋 白 质 G O 分 析 5 . 蛋 白 质 P a t h w a y 通 路 分 析 6 . 蛋 白 质 C O G 分 析 7 . 差 异 蛋 白 的 G O 富 集 分 析 8 . 差 异 蛋 白 的 P a t h w a y 通 路 富 集 分 析 9 . 差 异 蛋 白 的 C O G 富 集 分 析 样 本 类 型   细 胞 ， 组 织 ， 尿 液 ， 全 血 ， 血 清 ， 血 浆 ， 总 蛋 白 等 建 议 总 蛋 白 起 始 量 （ 单 次 ） ： ≥ 5 0 0 μ g ， 浓 度 ≥ 1 μ g / μ L 代 表 性 文 章   1 . W a n g L ， e t a l . P r o t e o m e p r o f i l i n g r e v e a l s i m m u n e r e s p o n s e s i n J a p a n e s e f l o u n d e r ( P a r a l i c h t h y s o l i v a c e u s ) i n f e c t e d w i t h E d w a r d s i e l l a t a r d a b y i T R A Q a n a l y s i s . F i s h S h e l l f i s h I m m u n o l . 2 0 1 7 J u l ; 6 6 : 3 2 5 3 3 3 . d o i : 1 0 . 1 0 1 6 / j . f s i . 2 0 1 7 . 0 5 . 0 2 2 2 . Z h a n g G , Z h a n g J , W e n X , e t a l . C o m p a r a t i v e i T R A Q b a s e d q u a n t i t a t i v e p r o t e o m i c a n a l y s i s o f P e l t e o b a g r u s v a c h e l l i l i v e r a g a i n s t a c u t e h y p o x i a : I m p l i c a t i o n s i n m e t a b o l i c r e s p o n s e s . [ J ] . P r o t e o m i c s , 2 0 1 7 . 3 . L i R , Y u H , Y u e Y , e t a l . C o m b i n e d p r o t e o m i c s a n d t r a n s c r i p t o m i c s i d e n t i f i e s s t i n g r e l a t e d t o x i n s o f j e l l y f i s h C y a n e a n o z a k i i . [ J ] . J o u r n a l o f P r o t e o m i c s , 2 0 1 6 , 1 4 8 : 5 7 . 4 . L v L X , e t a l . ( 2 0 1 6 ) I n t e g r a t e d t r a n s c r i p t o m i c a n d p r o t e o m i c a n a l y s i s o f t h e b i l e s t r e s s r e s p o n s e i n p r o b i o t i c L a c t o b a c i l l u s s a l i v a r i u s L I 0 1 . J o u r n a l o f P r o t e o m i c s . d o i . o r g / 1 0 . 1 0 1 6 / j . j p r o t . 2 0 1 6 . 0 8 . 0 2 1 5 . L v L X , e t a l . ( 2 0 1 6 ) I n t e g r a t e d t r a n s c r i p t o m i c a n d p r o t e o m i c a n a l y s i s o f t h e b i l e s t r e s s r e s p o n s e i n p r o b i o t i c L a c t o b a c i l l u s s a l i v a r i u s L I 0 1 . J o u r n a l o f P r o t e o m i c s . d o i . o r g / 1 0 . 1 0 1 6 / j . j p r o t . 2 0 1 6 . 0 8 . 0 2 1 6 . W a n g C , L i u C , W e i L , S h i L , P a n Z , M a o L , W a n X , P i n g Z , J i a n g T , C h e n Z . ( 2 0 1 6 ) A G r o u p o f N o v e l S e r u m D i a g n o s t i c B i o m a r k e r s f o r M u l t i d r u g R e s i s t a n t T u b e r c u l o s i s b y i T R A Q 2 D L C M S / M S a n d S o l e x a S e q u e n c i n g . I n t e r n a t i o n a l J o u r n a l o f B i o l o g i c a l S c i e n c e s 1 2 ( 2 ) , 2 4 6 2 5 6 . 7 . C u i Y , e t a l . ( 2 0 1 6 ) T r a n s c r i p t o m i c / p r o t e o m i c i d e n t i f i c a t i o n o f a l l e r g e n s i n t h e m i t e T y r o p h a g u s p u t r e s c e n t i a e . A l l e r g y . D O I : 1 0 . 1 1 1 1 / a l l . 1 2 9 9 9 8 . C a o J Y , e t a l . ( 2 0 1 6 ) T M T b a s e d q u a n t i t a t i v e p r o t e o m i c s a n a l y s e s r e v e a l n o v e l d e f e n s e m e c h a n i s m s o f B r a s s i c a n a p u s a g a i n s t t h e d e v a s t a t i n g n e c r o t r o p h i c p a t h o g e n S c l e r o t i n i a s c l e r o t i o r u m . J P r o t e o m i c s . d o i : 1 0 . 1 0 1 6 / j . j p r o t 结 果 展 示 K E G G 注 释 根 据 K E G G 注 释 总 表 ， 可 以 对 注 释 到 K E G G 的 差 异 蛋 白 总 体 情 况 进 行 U n i g e n e 数 目 的 统 计 。 K O G / C O G 注 释 C O G （ C l u s t e r s o f O r t h o l o g o u s G r o u p s o f p r o t e i n s ） ， 即 同 源 蛋 白 簇 。 一 般 原 核 生 物 用 C O G ， 真 核 生 物 用 K O G 。 C O G 注 释 作 用 ： 1 . 通 过 已 知 蛋 白 对 未 知 序 列 进 行 功 能 注 释 ； 2 . 通 过 查 看 指 定 的 C O G 编 号 对 应 的 p r o t e i n 数 目 ， 存 在 及 缺 失 ， 从 而 能 推 导 特 定 的 代 谢 途 径 是 否 存 在 ； 3 . 每 个 C O G 编 号 是 一 类 蛋 白 ， 将 q u e r y 序 列 和 比 对 上 的 C O G 编 号 的 p r o t e i n s 进 行 多 序 列 比 对 ， 能 确 定 保 守 位 点 ， 分 析 其 进 化 关 系 。   G O 富 集 分 析 G O 分 为 三 个 功 能 ： 生 物 进 程 （ b i o l o g i c a l p r o c e s s ） 细 胞 组 成 （ c e l l u l a r c o m p o n e n t ） 分 子 功 能 （ m o l e c u l a r f u n c t i o n ） 。 一 般 进 行 分 析 时 ， 会 取 前 5 0 个 差 异 较 为 明 显 的 蛋 白 绘 制 G O 注 释 图 。 分 别 对 应 这 三 个 功 能 的 差 异 蛋 白 数 量 为 2 5 个 ， 1 5 个 以 及 1 0 个 。 蛋 白 质 n e t w o r k 网 络 构 建 蛋 白 与 蛋 白 的 互 作 关 系 一 般 用 S t r i n g 软 件 绘 制 ， S t r i n g 可 以 用 来 查 找 蛋 白 间 的 作 用 关 系 及 作 用 强 度 ， 同 时 也 可 以 查 看 单 个 蛋 白 与 其 他 相 关 联 的 上 下 游 关 系 ， 可 以 为 老 师 研 究 蛋 白 互 作 关 系 提 供 思 路 。 案 例 展 示   转 录 组 及 蛋 白 质 组 学 技 术 分 析 益 生 菌 唾 液 乳 杆 菌 L I 0 1 的 胆 汁 应 激 反 应 研 究 背 景   最 近 发 现 几 种 唾 液 乳 杆 菌 菌 株 ， 表 现 出 良 好 的 益 生 菌 性 质 ， 如 抗 菌 活 性 ， 炎 症 调 节 ， 甚 至 是 肿 瘤 性 病 变 减 少 等 。 从 健 康 人 体 内 分 离 的 唾 液 乳 杆 菌 L I 0 1 已 经 在 预 防 和 治 疗 肝 衰 竭 中 表 现 出 了 益 生 菌 性 质 。 对 胆 汁 的 耐 受 对 于 乳 杆 菌 在 胃 肠 道 中 的 存 活 和 发 挥 其 益 处 至 关 重 要 。 研 究 结 果   通 过 转 录 组 测 序 和 i T R A Q 蛋 白 质 组 定 量 分 析 后 发 现 ， 与 空 白 对 照 相 比 ， 添 加 o x 胆 汁 溶 液 培 养 的 L I 0 1 菌 株 中 检 测 到 5 9 1 个 差 异 表 达 的 基 因 和 3 4 7 个 差 异 表 达 的 蛋 白 质 。 利 用 G O 和 K E G G 分 析 ， 发 现 差 异 表 达 的 基 因 主 要 参 与 胁 迫 应 答 ， 糖 酵 解 和 转 运 以 及 诸 如 碳 水 化 合 物 代 谢 和 氨 基 酸 生 物 合 成 等 途 径 ； 差 异 表 达 的 蛋 白 质 主 要 参 与 D N A 修 饰 、 基 因 表 达 和 细 胞 组 分 降 解 和 代 谢 过 程 的 调 节 。 图 差 异 表 达 基 因 及 差 异 表 达 蛋 白 质 的 K E G G 富 集 分 析   研 究 还 发 现 ， L I 0 1 的 胆 汁 耐 受 能 力 是 基 于 高 度 重 塑 的 细 胞 包 膜 以 及 增 强 的 胆 汁 外 排 系 统 ， 而 不 是 基 于 胆 盐 水 解 酶 的 活 性 。 一 些 差 异 表 达 的 基 因 是 与 调 节 系 统 即 应 激 反 应 和 中 枢 代 谢 过 程 相 关 的 基 因 ， 也 在 胆 汁 诱 导 的 损 伤 预 防 和 能 量 效 率 中 起 作 用 。 此 外 ， 胆 汁 盐 似 乎 增 强 了 L I 0 1 的 蛋 白 水 解 和 氨 基 酸 摄 取 （ 特 别 是 芳 香 族 氨 基 酸 ） 能 力 ， 这 个 结 果 表 明 该 菌 株 具 有 肝 保 护 的 性 质 。 总 而 言 之 ， 本 研 究 的 开 展 建 立 了 唾 液 乳 杆 菌 L I 0 1 中 胆 汁 应 激 的 全 局 反 应 机 制 的 模 型 。   参 考 文 献   L v L X , e t a l . ( 2 0 1 6 ) I n t e g r a t e d t r a n s c r i p t o m i c a n d p r o t e o m i c a n a l y s i s o f t h e b i l e s t r e s s r e s p o n s e i n p r o b i o t i c L a c t o b a c i l l u s s a l i v a r i u s L I 0 1 . J o u r n a l o f P r o t e o m i c s . d o i . o r g / 1 0 . 1 0 1 6 / j . j p r o t . 2 0 1 6 . 0 8 . 0 2 1   常 见 问 题 1 . i T R A Q 能 否 鉴 定 新 蛋 白 ？ ？ i T R A Q 不 能 鉴 定 新 蛋 白 ， 只 能 做 定 量 。 定 量 的 基 本 原 理 是 根 据 肽 段 上 报 告 基 团 信 号 的 强 弱 来 计 算 ， 不 涉 及 内 参 蛋 白 。 同 时 ， 不 能 做 未 知 蛋 白 鉴 定 。 i T R A Q 产 品 的 分 析 都 是 基 于 对 数 据 库 的 筛 查 ， 所 以 必 须 是 序 列 已 知 的 蛋 白 才 可 以 检 测 到 。 2 . i T R A Q 蛋 白 定 量 能 鉴 定 多 少 个 蛋 白 ， 为 什 么 有 些 物 种 鉴 定 到 蛋 白 那 么 少 ？ 对 于 可 鉴 定 蛋 白 的 数 量 确 实 因 物 种 有 差 异 ， 原 因 是 鉴 定 蛋 白 是 通 过 筛 查 蛋 白 质 数 据 库 来 进 行 的 ， 如 果 某 个 物 种 没 有 很 好 的 基 因 组 注 释 信 息 或 转 录 组 注 释 信 息 ， 筛 查 得 到 的 信 息 也 会 很 少 。 尤 其 是 植 物 类 、 昆 虫 类 、 水 产 品 类 非 模 式 物 种 ， 往 往 只 能 鉴 定 不 到 1 k 个 蛋 白 。 3 . 蛋 白 鉴 定 是 不 是 一 定 要 依 赖 于 数 据 库 ？ 是 的 ， 所 有 蛋 白 产 品 里 的 蛋 白 鉴 定 ， 都 是 需 要 依 赖 数 据 库 的 。 数 据 库 信 息 的 完 整 性 ， 将 对 蛋 白 鉴 定 的 结 果 产 生 一 定 影 响 。 4 . i T R A Q 结 果 的 后 期 验 证 ？ 一 般 选 择 注 释 结 果 与 所 关 注 的 生 物 过 程 紧 密 相 关 的 蛋 白 或 者 差 异 显 著 的 蛋 白 来 做 后 期 验 证 。 i T R A Q 的 后 期 验 证 ， 通 常 采 用 w e s t e r n b l o t 。 而 植 物 中 ， 可 用 抗 体 较 少 ， 通 常 的 处 理 方 式 是 不 验 证 或 是 自 行 制 备 多 抗 进 行 验 证 ； 亦 可 进 行 m R N A 的 定 量 q P C R 验 证 ， 找 m R N A 和 蛋 白 的 关 联 。 两 种 方 式 都 已 有 文 章 发 表 。 了 解 详 情 单 细 胞 测 序 单 细 胞 测 序 技 术 ， 是 在 单 个 细 胞 水 平 上 对 基 因 组 、 转 录 组 、 表 观 组 进 行 高 通 量 测 序 分 析 的 一 项 新 技 术 。 它 能 够 揭 示 单 个 细 胞 的 基 因 结 构 和 基 因 表 达 状 态 ， 反 映 细 胞 间 的 异 质 性 ， 在 肿 瘤 、 发 育 生 物 学 、 微 生 物 学 、 神 经 科 学 等 领 域 发 挥 重 要 作 用 ， 正 成 为 生 命 科 学 研 究 的 焦 点 。 单 细 胞 测 序 工 作 流 程   单 细 胞 测 序 的 工 作 流 程 包 括 4 个 关 键 步 骤 ： 1 ) 单 细 胞 制 备 ， 2 ） 单 细 胞 分 离 和 文 库 制 备 ， 3 ） 测 序 和 初 级 分 析 ， 4 ） 数 据 可 视 化 与 解 读 。 在 整 个 工 作 流 程 中 ， 有 一 些 影 响 结 果 并 决 定 研 究 能 否 成 功 的 实 验 注 意 事 项 和 关 键 步 骤 。 想 要 获 得 准 确 的 数 据 ， 得 出 有 意 义 的 结 论 ， 需 要 精 心 设 计 实 验 ， 并 按 要 求 开 展 实 验 。   在 过 去 的 十 年 中 ， 随 着 细 胞 分 离 新 技 测 序 新 方 法 术 和 单 细 胞 和 新 应 用 的 发 展 ， 单 细 胞 鉴 定 和 研 究 领 域 取 得 了 重 大 进 展 。 随 着 单 细 胞 分 离 和 检 测 的 选 项 越 来 越 多 ， 实 验 方 案 的 多 样 性 显 著 增 加 ， 每 种 方 案 都 有 其 固 有 的 优 缺 点 。 因 此 ， 研 究 人 员 面 临 着 诸 多 决 策 问 题 ， 例 如 细 胞 通 量 、 测 序 深 度 、 所 需 转 录 本 长 度 、 是 否 应 纳 入 表 观 遗 传 或 蛋 白 水 平 测 量 等 。   想 要 充 分 利 用 单 细 胞 测 序 来 阐 明 复 杂 的 生 物 系 统 ， 精 心 设 计 实 验 和 优 化 工 作 流 程 的 每 个 步 骤 至 关 重 要 。 研 究 人 员 必 须 有 明 确 的 生 物 学 目 标 和 合 理 的 实 验 设 计 ， 才 能 选 择 出 针 对 其 研 究 问 题 的 最 佳 方 法 。 了 解 详 情 慢 病 毒 载 体 慢 病 毒 载 体 （ L e n t i v i r u s ） 是 一 类 改 造 自 人 免 疫 缺 陷 病 毒 （ H I V ） 的 病 毒 载 体 ， 是 逆 转 录 病 毒 的 一 种 ， 基 因 组 是 R N A ， 其 毒 性 基 因 已 经 被 剔 除 并 被 外 源 性 目 的 基 因 所 取 代 ， 属 于 假 型 病 毒 可 将 外 源 基 因 整 合 到 基 因 组 中 实 现 稳 定 表 达 ， 具 有 感 染 分 裂 期 与 非 分 裂 期 细 胞 的 特 性 。 　 　 慢 病 毒 基 因 组 进 入 细 胞 后 ， 在 细 胞 浆 中 反 转 录 为 D N A ， 形 成 D N A 整 合 前 复 合 体 ， 进 入 细 胞 核 后 ， D N A 整 合 到 细 胞 基 因 组 中 。 整 合 后 的 D N A 转 录 成 m R N A ， 回 到 细 胞 浆 中 ， 表 达 目 的 蛋 白 或 产 生 小 R N A 。 慢 病 毒 介 导 的 基 因 表 达 或 小 R N A 干 扰 作 用 持 续 且 稳 定 ， 并 随 细 胞 基 因 组 的 分 裂 而 分 裂 （ 图 1 ） 。 　 　 图 1 慢 病 毒 包 装 和 侵 染 细 胞 的 过 程 　 　 慢 病 毒 载 体 具 有 宿 主 范 围 广 ， 免 疫 原 性 低 ， 基 因 容 量 大 ， 可 以 长 期 表 达 等 特 点 。 能 够 有 效 地 感 染 培 养 的 肿 瘤 细 胞 、 肝 细 胞 、 心 肌 细 胞 、 神 经 元 、 内 皮 细 胞 、 干 细 胞 等 多 种 类 型 的 细 胞 。 　 　 慢 病 毒 的 感 染 具 有 整 合 特 性 ， 能 够 将 外 源 基 因 有 效 地 整 合 到 宿 主 染 色 体 上 ， 达 到 持 久 性 表 达 ， 因 而 可 构 建 稳 定 细 胞 株 ， 用 于 基 因 的 细 胞 功 能 研 究 。 借 助 慢 病 毒 载 体 改 造 T 细 胞 可 用 于 C A R T 细 胞 治 疗 。 慢 病 毒 包 装 与 纯 化 　 　 慢 病 毒 包 装 采 用 三 质 粒 或 四 质 粒 系 统 进 行 包 装 ， 收 集 细 胞 培 养 上 清 ， 通 过 超 速 离 心 浓 缩 纯 化 和 收 集 病 毒 。 慢 病 毒 滴 度 检 测 　 　 检 测 方 法 ： 定 量 P C R 检 测 感 染 后 细 胞 基 因 组 中 外 源 D N A 拷 贝 数 　 　 实 验 原 理 ： 慢 病 毒 介 导 外 源 基 因 以 逆 转 录 方 式 整 合 进 目 的 细 胞 基 因 组 慢 病 毒 载 体 优 势 ①   表 达 时 间 长 ： 慢 病 毒 可 将 外 源 基 因 整 合 到 宿 主 细 胞 基 因 组 上 ， 实 现 基 因 长 时 间 稳 定 的 表 达 ， 不 随 细 胞 分 裂 传 代 而 丢 失 ， 是 细 胞 实 验 的 首 选 ， 常 用 于 构 建 稳 定 株 。 ② 安 全 性 高 ： 未 发 现 致 病 性 ， 慢 病 毒 载 体 改 造 T 细 胞 用 于 C A R T 细 胞 治 疗 。 ③ 免 疫 原 性 低 ： 直 接 注 射 活 体 组 织 不 易 造 成 免 疫 反 应 ， 适 用 于 动 物 实 验 。 不 同 病 毒 的 生 物 学 特 性 比 较 载 体 选 择 　 　 和 元 生 物 拥 有 丰 富 的 慢 病 毒 产 品 ， 用 于 操 作 编 码 基 因 和 非 编 码 基 因 ， 如 l n c R N A 、 m i c r o R N A 、 c i r c R N A ， 如 下 慢 病 毒 载 体 可 供 您 选 择 （ 不 限 于 此 列 表 ） ： 调 控 方 式 载 体 编 号 载 体 名 称 （ 载 体 元 件 顺 序 ） 真 核 抗 性 荧 光 启 动 子 默 认 标 签 载 体 容 量       过 表 达 G L 1 2 7 p S L e n t i C M V E G F P 3 x F L A G W P R E N / A E G F P C M V 3 F L A G 4 . 8 k b G L 1 2 1 p S L e n t i E F 1 E G F P C M V M C S W P R E N / A E G F P C M V N / A 4 . 4 k b G L 1 2 9 p S L e n t i C M V m C h e r r y 3 x F L A G W P R E N / A m C h e r r y C M V 3 F L A G 4 . 8 k b G L 1 1 9 p S L e n t i C M V M C S 3 x F L A G P G K P u r o W P R E P u r o N / A C M V 3 F L A G 4 . 4 k b G L 1 2 0 p S L e n t i S F H E G F P P 2 A P u r o C M V M C S 3 x F L A G W P R E P u r o E G F P C M V 3 F L A G 3 . 5 k b G L 1 0 7 p S L e n t i E F 1 E G F P P 2 A P u r o C M V M C S 3 x F L A G W P R E P u r o E G F P C M V 3 F L A G 3 . 7 k b G L 1 0 9 p S L e n t i E F 1 E G F P F 2 A P u r o C M V M C S W P R E P u r o E G F P C M V N / A 3 . 8 k b G L 1 2 2 p S L e n t i E F 1 E G F P F 2 A B S R C M V M C S W P R E b l a s t i c i d i n E G F P C M V N / A 3 . 9 k b G L 1 3 0 p S L e n t i C M V E G F P 3 x F L A G P G K P u r o W P R E P u r o E G F P C M V 3 F L A G 3 . 7 k b G L 1 3 2 p S L e n t i E F 1 E G F P F 2 A P u r o W P R E 2 C M V M C S P u r o E G F P C M V N / A 3 . 7 k b G L 1 2 3 p S L e n t i E F 1 m C h e r r y P 2 A P u r o C M V M C S 3 x F L A G W P R E P u r o m C h e r r y C M V 3 F L A G 3 . 7 k b G L 1 2 5 p S L e n t i C M V m C h e r r y 3 x F L A G P G K P u r o W P R E P u r o m C h e r r y C M V 3 F L A G 3 . 7 k b G L 1 3 3 p S L e n t i E F 1 m C h e r r y F 2 A P u r o W P R E 2 C M V M C S P u r o m C h e r r y C M V N / A 3 . 7 k b H 1 1 4 p L e n t i C M V L u c 2 I R E S P u r o W P R E P u r o N / A C M V N / A 2 . 2 k b G L 1 2 4 p S L e n t i E F 1 L u c 2 F 2 A P u r o C M V M C S W P R E P u r o N / A C M V N / A 2 . 8 k b   表 达 c r e H 1 2 6 p L e n t i C M V N L S C r e 3 x F L A G W P R E N / A N / A C M V 3 F L A G 3 . 9 k b H 1 5 1 0 8 p L e n t i C M V D I O M C S W P R E N / A N / A C M V 3 F L A G 5 . 3 k b 三 标 H 7 6 5 6 p L e n t i C B h 3 x F L A G L u c 2 t C M V m N e o n G r e e n F 2 A P u r o W P R E P u r o m N e o n G r e e n C B h 3 F L A G 1 . 3 k b H 7 6 5 7 p L e n t i C B h 3 x F L A G L u c 2 t C M V t d T o m a t o F 2 A P u r o W P R E P u r o t d T o m a t o C B h 3 F L A G 0 . 6 k b H 9 9 1 1 p L e n t i C B h 3 x F L A G L u c 2 t C M V m N e o n G r e e n F 2 A B S R W P R E b l a s t i c i d i n m N e o n G r e e n C B h 3 F L A G 1 . 5 k b H 9 9 1 2 p L e n t i C B h 3 x F L A G L u c 2 t C M V t d T o m a t o F 2 A B S R W P R E b l a s t i c i d i n t d T o m a t o C B h 3 F L A G 0 . 8 k b c i r c R N A 过 表 达 H 8 3 8 4 p L e n t i E F 1 E G F P F 2 A P u r o C M V S c i r c R N A W P R E N / A E G F P C M V N / A 3 . 0 k b H 8 8 0 7 p L e n t i C M V S c i r c R N A W P R E N / A N / A C M V N / A 4 . 8 k b H 8 3 9 9 p L e n t i E F 1 E G F P F 2 A P u r o C M V L c i r c R N A W P R E P u r o E G F P C M V N / A 1 . 0 k b H 8 8 1 0 p L e n t i C M V L c i r c R N A W P R E N / A N / A C M V N / A 2 . 8 k b m i R N A 过 表 达 G L 1 0 9 p S L e n t i E F 1 E G F P F 2 A P u r o C M V M C S W P R E P u r o E G F P C M V N / A N / A H 3 9 1 9 p C L e n t i U 6 m i R 3 0 ( m i R N A ) C M V E G F P F 2 A P u r o W P R E P u r o E G F P U 6 N / A N / A H 1 1 9 p L e n t i C M V T u r b o G F P I R E S P u r o m i R 3 0 ( m i R N A ) W P R E P u r o T u r b o G F P C M V N / A N / A H 3 9 2 8 p C L e n t i U 6 m i R 3 0 ( m i R N A ) C M V m C h e r r y F 2 A P u r o W P R E P u r o m C h e r r y U 6 N / A N / A H 1 4 6 p C L e n t i E F 1 P u r o C M V E G F P 3 x F L A G S p o n g e ( m i R N A ) W P R E P u r o E G F P C M V 3 F L A G N / A H 7 5 0 5 p C L e n t i U 6 T u D ( m i R N A ) C M V E G F P F 2 A B S R W P R E b l a s t i c i d i n E G F P C M V N / A N / A H 7 5 0 6 p C L e n t i U 6 T u D ( m i R N A ) C M V E G F P F 2 A P u r o W P R E P u r o E G F P C M V N / A N / A 过 表 达 （ T e t o n ） H 1 2 5 p L e n t i T R E E G F P E F 1 r t T A 3 I R E S P u r o W P R E P u r o E G F P T R E N / A 2 . 0 k b H 1 2 1 p L e n t i T R E E G F P 3 x F L A G P G K P u r o W P R E P u r o E G F P T R E 3 F L A G 3 . 3 k b H 2 0 5 7 p L e n t i E F 1 r t T A 3 I R E S P u r o W P R E P u r o N / A E F 1 N / A N / A s h R N A 干 扰 G L 4 0 1 p C L e n t i U 6 s h R N A C M V P u r o W P R E P u r o N / A U 6 N / A N / A G L 4 0 4 p C L e n t i U 6 s h R N A C M V E G F P W P R E N / A E G F P U 6 N / A N / A G L 4 2 7 p S L e n t i U 6 s h R N A C M V E G F P F 2 A P u r o W P R E P u r o E G F P U 6 N / A N / A G L 4 2 8 p S L e n t i U 6 s h R N A C M V m C h e r r y F 2 A P u r o W P R E P u r o m C h e r r y U 6 N / A N / A H 7 6 1 5 p C L e n t i U 6 s h R N A C M V m C h e r r y F 2 A B S R W P R E b l a s t i c i d i n m C h e r r y U 7 N / A N / A C R I S P R 敲 除 H 5 0 7 0 p L e n t i U 6 s p g R N A v 2 . 0 C M V P u r o P 2 A 3 x F L A G s p C a s 9 W P R E P u r o N / A U 6 N / A N / A H 7 0 7 2 p L e n t i U 6 s p g R N A v 2 . 0 C M V B S R P 2 A 3 x F L A G s p C a s 9 W P R E b l a s t i c i d i n N / A U 6 N / A N / A H 6 8 2 5 p L e n t i U 6 s p g R N A v 2 . 0 C M V s f G F P P 2 A 3 x F L A G s p C a s 9 W P R E N / A s f G F P U 6 N / A N / A H 5 0 6 8 p L e n t i U 6 s p g R N A v 2 . 0 C M V E G F P W P R E N / A E G F P U 7 N / A N / A H 5 4 5 0 p L e n t i C M V P u r o P 2 A 3 x F L A G e s p C a s 9 _ 1 . 1 W P R E P u r o N / A C M V 3 F L A G N / A C R I S P R a 转 录 激 活 H 9 5 1 7 p C L e n t i U 6 g R N A M S 2 E F S d C a s 9 V P 6 4 T 2 A B S D W P R E b l a s t i c i d i n N / A U 6 N / A N / A E 2 5 7 7 p C L e n t i E F 1 a M C P P 6 5 H S F 1 T 2 A H y g r o W P R E h y g r o m y c i n N / A E F 1 a N / A N / A H 7 2 8 1 p L e n t i C M V d C a s 9 V P 6 4 T 2 A P u r o W P R E P u r o N / A C M V N / A N / A 常 规 应 用 　 　 体 外 感 染 细 胞 　 　 　 慢 病 毒 载 体 能 够 有 效 地 感 染 培 养 的 肿 瘤 细 胞 、 肝 细 胞 、 心 肌 细 胞 、 神 经 元 、 内 皮 细 胞 、 干 细 胞 等 多 种 类 型 原 代 细 胞 和 大 部 分 细 胞 系 。 　 　 　 慢 病 毒 的 感 染 具 有 整 合 特 性 ， 能 够 将 外 源 基 因 有 效 地 整 合 到 宿 主 染 色 体 上 ， 因 而 可 以 达 到 持 久 性 表 达 ， 从 而 构 建 稳 转 细 胞 株 ， 体 外 进 行 细 胞 功 能 学 实 验 ， 包 括 细 胞 增 殖 、 侵 袭 、 迁 移 、 凋 亡 等 研 究 。 稳 定 表 达 目 的 基 因 的 肿 瘤 细 胞 株 还 可 以 进 一 步 构 建 肿 瘤 动 物 模 型 ， 进 行 体 内 基 因 功 能 验 证 ， 药 效 药 代 ， 活 体 成 像 等 检 测 ， 进 一 步 研 究 体 内 肿 瘤 发 生 、 发 展 和 转 移 及 药 物 治 疗 的 效 果 。 　 　 常 见 M O I 列 表 细 胞 名 中 文 名 称 慢 病 毒 感 染 M O I （ 参 考 值 ） M G C 8 0 3 人 胃 癌 细 胞 1 0 H T 2 9 人 结 肠 癌 细 胞 2 0 R K O 人 结 肠 腺 癌 细 胞 1 0 C a k i 1 人 肾 透 明 细 胞 癌 皮 肤 转 移 细 胞 1 0 5 6 3 7 人 膀 胱 癌 细 胞 1 0 U 1 1 8 M G 人 脑 星 形 胶 质 母 细 胞 瘤 1 0 R W P E 1 人 正 常 前 列 腺 上 皮 细 胞 2 0 H e L a 人 宫 颈 癌 细 胞 1 0 ~ 2 0 C a S k i 人 宫 颈 癌 肠 转 移 细 胞 1 0 M C F 7 [ M C F 7 ] 人 乳 腺 癌 细 胞 1 0 A 5 4 9 人 非 小 细 胞 肺 癌 细 胞 1 0 N C I H 1 2 9 9 人 非 小 细 胞 肺 癌 细 胞 2 0 U 8 7 M G 人 脑 星 形 胶 质 母 细 胞 瘤 1 0 U 2 5 1 人 胶 质 瘤 细 胞 1 0 A 1 7 2 人 胶 质 母 细 胞 瘤 细 胞 1 0 K 5 6 2 人 慢 性 髓 原 白 血 病 细 胞 1 0 H L 6 0 人 原 髓 细 胞 白 血 病 细 胞 1 0 G E S 1 人 胃 上 皮 细 胞 2 0 U 2 6 6 人 骨 髓 瘤 细 胞 2 0 C A L 2 7 人 舌 鳞 癌 细 胞 2 0 P C 9 人 肺 癌 细 胞 5 P C 1 4 人 肺 癌 细 胞 1 0 M A D B 1 0 6 大 鼠 乳 腺 癌 细 胞 2 0 F 9 8 大 鼠 脑 胶 质 瘤 细 胞 2 0 M H C C 9 7 H 人 肝 癌 细 胞 （ 高 转 移 ） 1 0 ~ 2 0   　 　 　 M O I 是 m u l t i p l i c i t y o f i n f e c t i o n 的 缩 写 ， 即 感 染 复 数 ， 其 含 义 是 感 染 时 病 毒 与 细 胞 的 数 量 比 值 ， 一 般 以 实 验 中 某 个 细 胞 ， 感 染 达 到 8 0 % ， 定 义 为 这 个 细 胞 的 M O I 值 ， 即 病 毒 量 与 细 胞 数 的 比 值 ； 加 的 病 毒 量 ( μ l ) = 细 胞 数 × M O I / 滴 度 ( … / m l ) × 1 0 0 0 慢 病 毒 在 肿 瘤 研 究 中 的 应 用 案 例   1 . N a t u r e C o m m u n i c a t i o n s . ( I F = 1 2 . 3 5 3 ) . S h i Y , e t . a l . ( 2 0 1 7 ) . T u m o u r a s s o c i a t e d m a c r o p h a g e s   s e c r e t e p l e i o t r o p h i n t o p r o m o t e P T P R Z 1 s i g n a l l i n g i n g l i o b l a s t o m a s t e m c e l l s f o r t u m o u r g r o w t h . [ 慢 病 毒 , 胶 质 细 胞 瘤 ] 慢 病 毒 干 扰 ：   L e n t i s h N T / s h P T N / s h P T P R Z 1 2 .   H e p a t o l o g y . ( I F = 1 4 . 0 7 9 ) . M a J Z , e t . a l . ( 2 0 1 6 ) . M E T T L 1 4 s u p p r e s s e s t h e m e t a s t a t i c p o t e n t i a l o f   H C C b y m o d u l a t i n g m 6 A d e p e n d e n t p r i m a r y m i R N A p r o c e s s i n g . [ 慢 病 毒 , 肝 癌 ] 慢 病 毒 过 表 达 / 干 扰 ： p L V C M V P G K E G F P T 2 A p u r o /   p L V U 6 s h R N A C M V E G F P T 2 A p u r o   慢 病 毒 在 神 经 系 统 的 应 用 （ 在 体 注 射 ） 1 ． N a t u r e N e u r o s c i e n c e . ( I F = 1 9 . 9 1 2 ) . D i n g X L , e t . a l . ( 2 0 1 7 ) . A c t i v i t y i n d u c e d h i s t o n e m o d i f i c a t i o n s   g o v e r n N e u r e x i n 1 m R N A s p l i c i n g a n d m e m o r y p r e s e r v a t i o n . [ 慢 病 毒 , 学 习 与 记 忆 ] 病 毒 类 型 ： 慢 病 毒 载 体 名 称 ： L V S u v 3 9 h 1 R N A i （ 不 确 定 详 细 的 ） 注 射 部 位 ： 海 马 D G 区 病 毒 注 射 量 ： 2 μ L ， 9 . 9 8 × 1 0 8   T U / m L 检 测 时 间 ： 2 周   2 ． N a t u r e C o m m u n i c a t i o n s . ( I F = 1 2 . 3 5 3 ) . Y a o X H , e t . a l . ( 2 0 1 6 ) . E l e c t r i c a l c o u p l i n g r e g u l a t e s l a y e r 1   i n t e r n e u r o n m i c r o c i r c u i t f o r m a t i o n i n t h e n e o c o r t e x . [ 慢 病 毒 , 神 经 环 路 ] 病 毒 类 型 ： 慢 病 毒 载 体 名 称 ： L V C X 3 6 s h R N A E G F P （ 不 确 定 详 细 的 ） 注 射 部 位 ： P 1 小 鼠 新 皮 层 L 1 病 毒 注 射 量 ： 1 μ L 检 测 时 间 ： 2 周 3 ． M o l e c u l a r P s y c h i a t r y . ( I F = 1 1 . 6 4 ) . G u o D J , e t . a l . ( 2 0 1 9 ) . A u t i s m l i k e s o c i a l d e f i c i t g e n e r a t e d b y D o c k 4 d e f i c i e n c y i s r e s c u e d b y r e s t o r a t i o n o f R a c 1 a c t i v i t y a n d N M D A r e c e p t o r f u n c t i o n . [ 慢 病 毒 , 自 闭 症 ]   病 毒 类 型 ： 慢 病 毒 载 体 名 称 ： L e n t i C M V E G F P P 2 A 3 F L A G R a c 1 注 射 部 位 ： 小 鼠 海 马 C A 1 区 病 毒 注 射 量 ： 1 μ L 检 测 时 间 ： 4 周   慢 病 毒 延 伸 服 务   和 元 生 物 慢 病 毒 的 生 产 和 质 控 采 取 了 国 际 学 术 界 公 认 的 标 准 流 程 ， 采 用 三 质 粒 或 四 质 粒 系 统 在 2 9 3 T 细 胞 中 进 行 包 装 。 所 获 得 的 病 毒 颗 粒 经 过 超 速 离 心 纯 化 ， 并 通 过 q P C R 对 病 毒 基 因 拷 贝 进 行 滴 定 。 一 般 情 况 下 我 们 的 慢 病 毒 的 滴 度 在 1 0 8 ~ 1 0 9 T U / m l ， 完 全 可 以 满 足 各 类 实 验 的 使 用 要 求 。 了 解 详 情 基 因 过 表 达 基 因 功 能 研 究 中 通 常 需 要 上 调 目 的 基 因 的 表 达 来 观 察 表 型 的 变 化 。 过 表 达 是 将 目 的 基 因 在 宿 主 细 胞 大 量 表 达 的 过 程 ， 其 基 本 原 理 是 将 目 的 基 因 构 建 到 工 具 载 体 上 ， 导 入 细 胞 使 基 因 实 现 大 量 转 录 和 翻 译 ， 从 而 实 现 基 因 产 物 的 过 表 达 。 工 具 载 体 通 常 包 括 原 核 表 达 载 体 、 普 通 真 核 表 达 载 体 、 慢 病 毒 载 体 、 腺 相 关 病 毒 载 体 、 腺 病 毒 载 体 和 逆 转 录 病 毒 载 体 等 。 工 具 载 体 介 绍 根 据 实 验 需 要 不 同 ， 目 的 基 因 大 小 等 选 择 不 同 的 载 体 ， 包 括 真 核 表 达 载 体 和 病 毒 载 体 等 均 可 以 实 现 编 码 基 因 和 非 编 码 基 因 的 过 表 达 。 表 达 系 统 真 核 表 达 载 体 慢 病 毒 载 体 重 组 腺 相 关 病 毒 载 体 重 组 腺 病 毒 载 体 载 体 基 因 特 性 双 链 D N A 质 粒 R N A 逆 转 录 病 毒 单 链 D N A 病 毒 双 链 D N A 病 毒 外 源 基 因 表 达 时 间 2 4 h 开 始 表 达 ， 持 续 3 7 天 2 4 天 开 始 表 达 ， 长 时 间 稳 定 表 达 7 1 4 天 开 始 表 达 1 2 天 开 始 表 达 插 入 片 段 大 小 8 k b 左 右 4 k b 左 右 2 . 8 k b 左 右 4 k b 左 右 稳 定 细 胞 株 筛 选 难 操 作 可 以 不 可 以 不 可 以 ， 瞬 时 表 达 细 胞 实 验 细 胞 系 ， 部 分 转 染 效 率 低 首 选 ， 广 谱 ， 感 染 效 率 高 细 胞 系 ， 部 分 血 清 型 转 染 效 率 低 广 谱 ， 感 染 效 率 高 动 物 实 验 不 适 合 适 合 ， 根 据 观 察 时 间 和 注 射 部 位 首 选 ， 根 据 观 察 时 间 和 注 射 部 位 免 疫 原 性 高 ， 慎 选 滴 度 范 围 无 1 0 8 ~ 1 0 9 T U / m l 1 0 1 2 1 0 1 3 V G / m l 1 0 1 0 1 0 1 1 P F U / m l 载 体 图 谱 中 常 见 元 件 介 绍 元 件 名 称 类 型 用 途 启 动 子 C M V 、 C A G 、 E F 1 a 、 U 6 等 广 谱 或 特 异 启 动 目 的 基 因 的 表 达 h S y n 、 C a M K I I α 等 特 异 性 启 动 子 ， 在 特 定 的 组 织 细 胞 中 启 动 目 的 基 因 的 表 达 蛋 白 标 签 3 x F L A G 、 H A 、 6 x H i s 、 M y c 等 与 目 的 基 因 融 合 表 达 ， 常 用 于 检 测 外 源 蛋 白 表 达 水 平 荧 光 标 记 E G F P 、 m C h e r r y 、 m N e o n G r e e n 等 可 与 目 的 基 因 融 合 或 非 融 合 表 达 用 于 检 测 转 染 、 感 染 效 果 抗 性 基 因 P u r o 、 N e o 、 H y g r o 、 B S D 等 真 核 抗 性 ， 常 用 于 稳 定 株 筛 选 A m p 、 K a n 原 核 抗 性 ， 常 用 于 原 核 细 菌 培 养 ， 质 粒 扩 增 连 接 元 件 L i n k e r 用 于 连 接 两 个 基 因 ， 融 合 表 达 时 常 用 ， 可 降 低 因 融 合 表 达 对 蛋 白 折 叠 和 功 能 的 影 响 I R E S 、 2 A 用 于 连 接 两 个 基 因 ， 达 到 非 融 合 表 达 的 效 果 其 它 元 件 W P R E 增 加 目 的 基 因 的 表 达 载 体 选 择 （ 部 分 ） 病 毒 载 体 的 选 择 ， 根 据 实 验 的 需 求 参 考 慢 病 毒 、 腺 相 关 病 毒 、 腺 病 毒 、 逆 转 录 病 毒 等 。 载 体 类 别 编 号 载 体 元 件 慢 病 毒 过 表 达 G L 1 2 7 p S L e n t i C M V E G F P 3 x F L A G W P R E G L 1 2 1 p S L e n t i E F 1 E G F P C M V M C S W P R E G L 1 0 7 p S L e n t i E F 1 E G F P P 2 A P u r o C M V M C S 3 x F L A G W P R E G L 1 2 2 p S L e n t i E F 1 E G F P F 2 A B S R C M V M C S W P R E G L 1 2 4 p S L e n t i E F 1 L u c 2 F 2 A P u r o C M V M C S W P R E 腺 病 毒 过 表 达 H 2 2 5   p A D V m C M V M C S 3 x F L A G H 2 0 1 p A D V m C M V E G F P 3 x F L A G H 2 1 3 p A D V m C M V 3 x F L A G E G F P H 2 0 4 p A D V m C M V m C h e r r y H A 腺 相 关 病 毒 过 表 达 A O V 0 2 4 p A A V C M V E G F P P 2 A 3 x F L A G W P R E A O V 0 2 5 p A A V C M V m C h e r r y P 2 A 3 x F L A G W P R E A O V 0 6 4 p A A V h S y n E G F P P 2 A 3 x F L A G W P R E A O V 0 6 5 A A V h S y n m C h e r r y P 2 A 3 x F L A G W P R E H 9 4 2 9 p A A V C A G E G F P 3 x F L A G t W P A H 9 5 2 5 p A A V C M V E G F P 3 x F L A G t W P A H 1 0 8 8 1 p A A V C A G E G F P 3 x F L A G t W P A H 1 0 8 8 6 p A A V C M V E G F P 3 x F L A G t W P A 服 务 简 介 根 据 客 户 提 供 的 基 因 信 息 ， 从 生 物 信 息 学 网 站 上 调 出 该 基 因 的 c D N A 序 列 ， 将 c D N A 序 列 构 建 到 工 具 载 体 中 ， 根 据 实 验 需 求 过 表 达 编 码 基 因 或 者 非 编 码 基 因 。 针 对 病 毒 载 体 ， 包 装 生 产 的 病 毒 颗 粒 可 以 直 接 用 于 感 染 细 胞 或 者 动 物 实 验 。 病 毒 载 体 服 务 流 程 了 解 详 情 基 因 干 扰 R N A 干 扰 ( R N A i n t e r f e r e n c e ， R N A i ) 是 正 常 生 物 体 内 抑 制 特 定 基 因 表 达 的 一 种 现 象 ， 当 细 胞 中 导 入 与 内 源 性 m R N A 编 码 区 同 源 的 双 链 R N A ( d o u b l e s t r a n d e d R N A ， d s R N A ) 时 ， 该 m R N A 发 生 降 解 而 导 致 基 因 表 达 沉 默 的 现 象 。 外 源 d s R N A 进 入 细 胞 后 产 生 的 小 分 子 干 扰 R N A （ s m a l l i n t e r f e r i n g R N A , s i R N A ） 的 反 义 链 和 多 种 核 酸 酶 形 成 了 沉 默 复 合 物 ( R N A i n d u c e d s i l e n c i n g c o m p l e x ， R I S C ) ， R I S C 具 有 结 合 和 切 割 m R N A 的 作 用 而 介 导 R N A 干 扰 的 过 程 。 载 体 选 择 （ 部 分 ） 病 毒 载 体 的 选 择 ， 根 据 实 验 的 需 求 参 考 慢 病 毒 、 腺 相 关 病 毒 、 腺 病 毒 、 逆 转 录 病 毒 等 。 载 体 类 别 编 号 载 体 元 件 慢 病 毒 干 扰 G L 4 0 1 p C L e n t i U 6 s h R N A C M V P u r o W P R E   G L 4 0 4 p C L e n t i U 6 s h R N A C M V E G F P W P R E G L 4 0 7 p C L e n t i U 6 s h R N A C M V E G F P F 2 A P u r o W P R E G L 4 0 8 G L 4 0 8 p C L e n t i U 6 s h R N A C M V m C h e r r y F 2 A P u r o W P R E H 7 6 1 5 p C L e n t i U 6 s h R N A C M V m C h e r r y F 2 A B S R W P R E 腺 病 毒 干 扰 D K D 0 0 1 p A D V U 6 s h R N A C M V E G F P D K D 0 0 4 p A D V U 6 s h R N A C M V m C h e r r y 腺 相 关 病 毒 干 扰 A K D 0 0 1 p A A V C B G E G F P 3 x F L A G W P R E H 1 s h R N A A K D 0 0 3 p A A V C B G m C h e r r y 3 x F L A G W P R E H 1 s h R N A H 1 2 6 6 3 p A A V U 6 s h R N A / s p g R N A v 2 . 0 C M V E G F P W P R E   服 务 简 介 　 　 根 据 客 户 提 供 的 目 的 基 因 ， 针 对 该 基 因 设 计 3 个 s i R N A 靶 点 ， 再 将 这 些 靶 点 构 建 到 相 关 载 体 ， 针 对 病 毒 载 体 ， 包 装 生 产 的 病 毒 颗 粒 可 以 直 接 用 于 感 染 细 胞 或 者 动 物 实 验 。 病 毒 载 体 服 务 流 程 了 解 详 情 稳 定 细 胞 株 构 建 外 源 基 因 在 细 胞 中 的 表 达 可 分 为 两 大 类 ， 一 类 是 瞬 时 表 达 ， 外 源 D N A / R N A 不 整 合 到 宿 主 染 色 体 中 ， 虽 然 可 以 达 到 高 水 平 的 表 达 ， 但 通 常 只 持 续 几 天 ； 一 类 是 稳 定 表 达 （ 构 建 稳 转 株 ） ， 外 源 D N A 整 合 到 宿 主 细 胞 染 色 体 上 ， 使 宿 主 细 胞 可 长 期 表 达 目 的 基 因 。 　 　 建 立 稳 定 细 胞 株 ， 基 本 原 理 是 将 外 源 D N A 克 隆 到 具 有 某 种 抗 性 的 载 体 上 ， 载 体 被 转 染 到 宿 主 细 胞 并 整 合 到 宿 主 染 色 体 中 ， 用 载 体 中 所 含 的 抗 性 标 志 进 行 筛 选 。 最 常 用 的 真 核 表 达 载 体 的 抗 性 筛 选 标 志 物 有 新 霉 素 （ n e o m y c i n ） 、 潮 霉 素 （ h y g r o m y c i n ） 和 嘌 呤 霉 素 ( p u r o m y c i n ) ， 筛 选 得 到 可 稳 定 表 达 目 的 蛋 白 、 或 稳 定 沉 默 特 定 基 因 的 细 胞 株 。 筛 选 方 法 慢 病 毒 感 染 筛 选 稳 定 细 胞 株 利 用 慢 病 毒 整 合 表 达 特 性 来 筛 选 稳 定 细 胞 株 ， 该 方 法 克 服 了 传 统 质 粒 挑 单 克 隆 方 法 周 期 久 的 弊 端 ， 可 以 在 短 时 间 内 高 效 获 取 稳 定 细 胞 株 。 利 用 慢 病 毒 制 备 稳 定 株 优 势 （ 1 ） 细 胞 适 用 种 类 广 泛 ， 可 用 于 各 种 哺 乳 动 物 细 胞 ； （ 2 ） 构 建 稳 转 株 时 间 短 ， 表 达 持 续 时 间 长 ； （ 3 ） 多 种 荧 光 标 记 和 抗 性 基 因 可 选 ， 满 足 观 测 实 验 要 求 。 稳 定 细 胞 株 分 类 　 　 混 合 克 隆 稳 定 细 胞 株 　 　 混 合 克 隆 细 胞 系 是 基 因 转 染 后 直 接 用 抗 药 筛 选 得 到 的 ， 筛 选 出 的 细 胞 都 表 达 抗 性 基 因 和 目 的 基 因 ， 但 包 含 了 各 种 不 同 的 细 胞 克 隆 。 不 同 克 隆 的 目 的 基 因 整 合 位 置 和 表 达 量 均 有 所 不 同 。 　 　 混 合 克 隆 细 胞 株 筛 选 比 较 快 速 ， 费 用 较 低 。 在 需 要 构 建 的 细 胞 株 转 染 效 率 高 ， 目 的 基 因 表 达 效 率 高 的 情 况 下 ， 单 克 隆 细 胞 株 最 后 得 到 的 表 达 效 果 和 混 合 克 隆 细 胞 株 并 没 有 显 著 差 异 ， 这 时 多 克 隆 细 胞 筛 选 是 理 想 的 选 择 。 　 　 单 克 隆 稳 定 细 胞 株 　 　 单 克 隆 细 胞 系 是 由 含 有 稳 定 整 合 外 源 片 段 的 单 个 细 胞 的 扩 增 得 到 的 细 胞 株 ， 每 个 细 胞 的 目 的 基 因 整 合 位 置 的 表 达 量 均 高 度 一 致 ， 但 可 能 丢 失 一 些 表 型 。 单 克 隆 细 胞 株 筛 选 周 期 长 ， 费 用 高 。 需 要 进 行 细 胞 亚 定 位 实 验 的 细 胞 系 ， 难 感 染 的 和 表 达 率 低 的 通 常 建 议 进 行 单 克 隆 细 胞 筛 选 。 服 务 流 程 已 构 建 的 稳 定 株 列 表 （ 部 分 ） 中 文 名 称 对 应 稳 定 株 对 应 培 养 条 件 细 胞 来 源 人 脑 星 形 胶 质 母 细 胞 瘤 U 8 7 M G l u c m N e o n G r e e n P u r o M E M + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 胶 质 瘤 细 胞 U 2 5 1 C M V E G F P P u r o D M E M + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 膀 胱 移 行 细 胞 癌 细 胞 T 2 4 E G F P P u r o R P M I 1 6 4 0 + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 胰 腺 癌 细 胞 系 S W 1 9 9 0 E G F P P u r o L 1 5 + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 神 经 母 细 胞 瘤 细 胞 S K N S H E G F P P u r o M E M + 1 0 % F B S + 0 . 4 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 乳 腺 癌 细 胞 S K B R 3 E G F P P u r o D M E M + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 子 宫 颈 鳞 癌 细 胞 S i H a C M V E G F P P u r o D M E M + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 小 鼠 脑 神 经 瘤 细 胞 N e u r o 2 a E G F P P u r o M E M + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 小 鼠 脑 神 经 瘤 细 胞 N e u r o 2 a C M V P u r o M E M + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 乳 腺 癌 细 胞 M D A M B 4 6 8 E G F P P u r o L 1 5 + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 乳 腺 癌 细 胞 M D A M B 2 3 1 C M V E G F P L u c P u r o L 1 5 + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 乳 腺 癌 细 胞 M C F 7 C M V E G F P P u r o M E M + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 小 鼠 肺 癌 细 胞 L L C C M V s f G F P L u c P u r o D M E M + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 慢 性 髓 原 白 血 病 细 胞 K 5 6 2 C M V E G F P P u r o R P M I 1 6 4 0 + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 T 淋 巴 细 胞 白 血 病 细 胞 J u r k a t C M V E G F P P u r o R P M I 1 6 4 0 + 1 0 % F B S + 0 . 5 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 子 宫 内 膜 癌 细 胞 i s h i k a w a C M V P u r o R P M I 1 6 4 0 + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 肝 癌 细 胞 H u H 7 C M V s f G F P L u c P u r o D M E M + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 肝 癌 细 胞 H u H 7 L u c P u r o D M E M + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 结 肠 癌 细 胞 H T 2 9 E G F P P u r o M c C o y ’ s 5 A + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 肝 癌 细 胞 H e p G 2 C M V E G F P L u c P u r o D M E M + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 肝 癌 细 胞 H e p G 2 C M V P u r o D M E M + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 宫 颈 癌 细 胞 H e L a E G F P P u r o D M E M + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 宫 颈 癌 细 胞 H e L a R F P P u r o D M E M + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 结 肠 癌 细 胞 H C T 1 1 6 C M V E G F P L u c P u r o M c C o y ’ s 5 A + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 咽 鳞 癌 细 胞 F a D u C M V E G F P P u r o M E M + 1 0 % F B S + 1 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 小 鼠 结 肠 癌 细 胞 C T 2 6 . W T C M V L u c P u r o R P M I 1 6 4 0 + 1 0 % F B S + 8 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 小 鼠 结 肠 癌 细 胞 C T 2 6 . W T C M V P u r o R P M I 1 6 4 0 + 1 0 % F B S + 8 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 肾 透 明 细 胞 癌 皮 肤 转 移 细 胞 C a k i 1 E G F P P u r o D M E M + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 仓 鼠 肾 成 纤 维 细 胞 B H K 2 1 [ C 1 3 ] C M V P u r o M E M + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 甲 状 腺 乳 头 状 癌 细 胞 B C P A P C M V E G F P P u r o R P M I 1 6 4 0 + 1 0 % F B S + 1 % N E A A + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 小 鼠 黑 色 素 瘤 细 胞 B 1 6 C M V P u r o R P M I 1 6 4 0 + 1 0 % F B S + 1 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 小 鼠 黑 色 素 瘤 细 胞 B 1 6 C M V E G F P P u r o R P M I 1 6 4 0 + 1 0 % F B S + 1 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 非 小 细 胞 肺 癌 细 胞 A 5 4 9 C M V E G F P P u r o F 1 2 K + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 非 小 细 胞 肺 癌 细 胞 A 5 4 9 l u c m N e o n G r e e n P u r o F 1 2 K + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 小 鼠 乳 腺 癌 细 胞 4 T 1 C M V L u c P u r o R P M I 1 6 4 0 + 1 0 % F B S + 1 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 小 鼠 乳 腺 癌 细 胞 4 T 1 C M V E G F P P u r o R P M I 1 6 4 0 + 1 0 % F B S + 1 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 胃 癌 细 胞 M K N 4 5 C B h l u c 2 m N e o n G r e e n A P u r o R P M I 1 6 4 0 + 2 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 协 和 人 肺 腺 癌 细 胞 N C I H 1 9 7 5 C B h l u c 2 m N e o n G r e e n A P u r o R P M I 1 6 4 0 + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 人 结 肠 癌 细 胞 H C T 1 1 6 C B h l u c 2 m N e o n G r e e n A P u r o M c C o y ’ s 5 A + 1 0 % F B S + 2 u g / m l P u r o m y c i n 中 科 院 了 解 详 情 敲 除 细 胞 株 构 建 C l u s t e r e d R e g u l a r l y I n t e r s p a c e d S h o r t P a l i n d r o m i c R e p e a t s （ C R I S P R ） / C a s 9 是 细 菌 和 古 细 菌 在 长 期 进 化 而 形 成 的 一 种 适 应 性 免 疫 防 御 机 制 ， C R I S P R / C a s 9 系 统 可 以 用 于 各 种 基 因 组 的 编 辑 。 C R I S P R / C a s 9 系 统 会 通 过 小 导 向 R N A ( s g R N A ) 对 切 割 区 域 进 行 识 别 ， 并 利 用 C a s 9 内 切 酶 实 现 在 识 别 位 点 中 间 预 测 的 位 置 切 割 ， 造 成 D N A 双 链 断 裂 ， 在 细 胞 进 行 易 错 修 复 后 造 成 随 机 的 突 变 。 C R I S P R / C a s 9 系 统 其 突 变 效 率 高 、 灵 活 简 单 ， 周 期 短 ， 成 本 低 ， 已 经 被 广 泛 的 应 用 于 基 因 编 辑 的 研 究 。 C R I S P R / C a s 9 系 统 应 用 的 领 域 是 基 因 敲 除 株 系 构 建 和 基 因 敲 除 动 物 的 研 究 。   公 司 可 提 供 项 目 服 务 包 括 ： C R I S P R / C a s 9 实 验 方 案 设 计 、 C R I S P R / C a s 9 基 因 敲 除 载 体 构 建 、 C R I S P R / C a s 9 基 因 敲 除 载 体 病 毒 包 装 、 C R I S P R / C a s 9 基 因 敲 除 细 胞 株 构 建 服 务 特 点 ：   1 定 制 特 定 基 因 敲 除 细 胞 系 只 需 提 供 基 因 名 称 ； 2 快 速 获 得 有 效 s g R N A ， 基 因 编 辑 效 率 高 ； 3 实 验 周 期 短 ； 4 可 根 据 需 要 提 供 C R I S P R / C a s 9 慢 病 毒 包 装 服 务 操 作 流 程   1 靶 向 目 的 序 列 s g R N A 的 设 计 、 载 体 构 建 及 活 性 验 证 2 目 的 细 胞 系 共 转 染 ， 初 步 筛 选 混 合 克 隆 3 铺 单 克 隆 ， 单 克 隆 筛 选 及 鉴 定 细 胞 基 因 型 4 阳 性 细 胞 株 的 扩 增 了 解 详 情 动 物 实 验 和 元 生 物 动 物 实 验 部 成 立 于 2 0 1 4 年 ， 拥 有 国 内 先 进 的 小 动 物 S P F 级 动 物 房 ， 设 有 实 验 动 物 管 理 委 员 会 ( I A C U C ) ， 具 有 上 海 科 委 颁 发 的 S P F 级 大 、 小 鼠 的 《 实 验 动 物 使 用 许 可 证 》 S Y X K （ 沪 ） 2 0 1 7 0 0 0 3 。 S P F 区 域 使 用 面 积 为 3 5 0 m 2 , 可 同 时 容 纳 饲 养 大 、 小 鼠 5 0 0 0 余 只 ， 为 客 户 同 时 提 供 约 5 0 1 0 0 批 动 物 实 验 项 目 服 务 。 动 物 房 屏 障 内 全 部 设 有 独 立 通 气 式 动 物 I V C 及 自 动 压 差 调 节 系 统 ， 温 湿 度 实 时 监 控 系 统 ， 人 、 动 物 、 物 品 分 离 并 单 向 流 动 路 线 ， 严 格 保 障 屏 障 内 环 境 。 和 元 生 物 动 物 实 验 部 所 有 实 验 操 作 人 员 均 接 受 过 严 格 的 培 训 管 理 ， 具 备 相 应 岗 位 资 格 证 书 。 同 时 ， 动 物 房 还 配 备 专 业 的 管 理 人 员 ， 严 格 保 障 屏 障 内 环 境 的 洁 净 度 和 动 物 的 质 量 控 制 。 目 前 ， 和 元 生 物 可 提 供 大 小 鼠 饲 养 繁 育 鉴 定 、 动 物 模 型 构 建 （ 包 括 肿 瘤 、 神 经 系 统 、 代 谢 疾 病 模 型 ） 、 药 理 药 效 学 评 价 、 行 为 学 及 病 理 检 测 一 站 式 服 务 ， 为 各 种 疾 病 的 机 制 研 究 和 新 药 的 开 发 提 供 良 好 的 科 研 平 台 。 大 小 鼠 扩 繁 服 务 ： 和 元 生 物 动 物 实 验 部 可 提 供 大 小 鼠 饲 养 繁 育 鉴 定 服 务 。 根 据 客 户 需 求 ， 提 供 最 为 专 业 的 交 配 饲 养 方 案 ， 提 高 繁 殖 效 率 、 节 省 饲 养 成 本 。 优 势 ： · 舒 适 、 洁 净 的 饲 养 环 境 · 严 格 的 质 量 控 制 管 理 体 系 · 高 度 重 视 动 物 福 利 ， 高 品 质 S P F 级 大 小 鼠 饲 养 · 短 时 间 一 次 性 获 得 大 量 相 同 基 因 型 子 代 小 鼠 了 解 详 情 肿 瘤 动 物 模 型 肿 瘤 动 物 模 型 在 肿 瘤 发 生 、 发 展 、 转 移 等 基 础 研 究 以 及 药 物 研 发 治 疗 上 扮 演 着 至 关 重 要 角 色 ， 因 此 肿 瘤 的 研 究 离 不 开 动 物 模 型 的 建 立 。 科 研 中 常 用 的 肿 瘤 模 型 有 以 下 几 种 ： 皮 下 成 瘤 、 原 位 成 瘤 、 尾 静 脉 注 射 模 型   皮 下 成 瘤 模 型 将 肿 瘤 细 胞 （ 或 肿 瘤 组 织 ） 直 接 接 种 在 小 鼠 的 皮 下 而 建 立 的 一 种 肿 瘤 动 物 模 型 。 该 肿 瘤 模 型 是 一 种 用 于 临 床 前 评 估 药 物 体 内 药 效 的 简 单 而 重 要 的 工 具 ， 同 时 ， 在 肿 瘤 的 发 病 机 制 、 药 物 作 用 的 研 究 中 亦 起 到 重 要 作 用 。 皮 下 成 瘤   该 模 型 操 作 简 单 方 便 ， 可 以 直 观 观 察 肿 瘤 的 生 长 ， 方 便 检 测 动 物 体 重 、 肿 瘤 生 长 曲 线 、 肿 瘤 重 量 等 重 要 数 据 ； 原 位 移 植 模 型 原 位 移 植 指 将 肿 瘤 细 胞 或 肿 瘤 组 织 块 原 位 移 植 到 免 疫 缺 陷 动 物 的 组 织 器 官 内 ， 使 之 产 生 肿 瘤 并 形 成 自 发 性 转 移 灶 。 其 方 法 是 将 稀 释 好 的 肿 瘤 细 胞 直 接 接 种 到 器 官 的 浆 膜 下 。 或 者 先 将 肿 瘤 细 胞 皮 下 接 种 ， 达 5 0 0 8 0 0 m m 3 左 右 ， 瘤 组 织 取 出 切 成 1 3 m m 3 的 小 块 ， 将 准 备 好 的 癌 组 织 块 植 入 器 官 的 浆 膜 下 ， 缝 合 浆 膜 ， 这 样 也 可 以 形 成 异 种 原 位 肿 瘤 。 常 用 原 位 接 种 包 括 ： 脑 、 肝 、 肌 肉 、 乳 腺 垫 原 位 。                                     原 位 移 植 模 型 能 更 好 的 模 拟 肿 瘤 细 胞 在 体 内 生 长 的 微 环 境 ， 模 拟 肿 瘤 生 长 甚 至 转 移 的 过 程 。 尾 静 脉 注 射 肿 瘤 转 移 模 型 肿 瘤 细 胞 经 尾 静 脉 注 射 后 ， 先 通 过 肺 部 的 毛 细 血 管 网 进 入 动 脉 血 液 循 环 系 统 ， 可 造 成 全 身 多 发 转 移 灶 。 但 是 由 于 肿 瘤 细 胞 较 为 粘 稠 易 聚 团 ， 一 般 会 被 困 在 小 鼠 肺 部 微 血 管 ， 主 要 形 成 肺 转 移 ， 可 能 后 期 会 造 成 远 端 器 官 的 转 移 。 主 要 用 于 建 立 肿 瘤 转 移 （ 血 行 通 路 ） 模 型 或 血 癌 模 型 或 者 肿 瘤 肺 转 移 。 尾 静 脉 注 射 乳 腺 癌 细 胞 肿 瘤 转 移 是 临 床 上 肿 瘤 致 死 的 最 主 要 原 因 ， 然 而 肿 瘤 转 移 的 机 制 和 过 程 非 常 复 杂 ， 目 前 尚 不 完 全 清 楚 。 建 立 转 移 模 型 ， 可 以 更 好 地 模 拟 肿 瘤 在 人 身 上 的 发 生 和 发 展 过 程 ， 对 药 物 筛 选 和 开 发 的 预 测 性 更 高 。   和 元 上 海 动 物 实 验 平 台 可 提 供 皮 下 成 瘤 、 原 位 成 瘤 、 尾 静 脉 注 射 转 移 成 瘤 等 多 种 肿 瘤 动 物 模 型 构 建 及 病 理 切 片 、 药 效 检 测 、 小 动 物 成 像 等 服 务 。 了 解 详 情 代 谢 类 疾 病 动 物 模 型 和 元 生 物 动 物 实 验 部 可 提 供 大 小 鼠 肥 胖 、 糖 尿 病 、 心 血 管 系 统 疾 病 及 炎 症 等 多 种 代 谢 及 循 环 系 统 疾 病 动 物 模 型 的 构 建 服 务 。   1 、 肝 损 伤 模 型 肝 脏 疾 病 是 发 生 在 肝 脏 的 所 有 疾 病 的 总 称 。 包 括 感 染 性 疾 病 、 肿 瘤 性 疾 病 、 血 管 性 疾 病 、 代 谢 性 疾 病 、 中 毒 性 疾 病 、 自 身 免 疫 性 疾 病 、 遗 传 性 疾 病 、 肝 内 胆 管 结 石 病 等 。 感 染 性 疾 病 又 包 括 病 毒 感 染 、 细 菌 感 染 、 寄 生 虫 感 染 等 ， 如 病 毒 性 肝 炎 、 肝 包 虫 病 等 。 肿 瘤 分 为 良 性 肿 瘤 和 恶 性 肿 瘤 ， 如 肝 癌 、 肝 血 管 瘤 、 肝 脂 肪 瘤 、 肝 肉 瘤 等 。 肝 脏 疾 病 动 物 模 型 的 运 用 范 围 非 常 广 。   四 氯 化 碳 诱 导 的 肝 损 伤 模 型 ： 通 过 腹 腔 注 射 不 同 剂 量 的 四 氯 化 碳 ( C C l 4 ) 致 小 鼠 急 性 肝 损 伤 , 检 测 小 鼠 血 浆 转 氨 酶 水 平 的 变 化 , 建 立 的 小 鼠 模 型 。 胆 汁 淤 积 型 小 鼠 肝 损 伤 模 型 ： 通 过 胆 管 结 扎 诱 导 胆 汁 淤 积 型 小 鼠 肝 损 伤 模 型 。   2 、 肾 缺 血 再 灌 注 损 伤 模 型 的 建 立 慢 性 肾 功 能 衰 竭 （ C R F ） 模 型 ： 大 鼠 5 / 6 肾 切 除 后 残 余 存 肾 单 位 的 血 液 动 力 学 改 变 ， 引 起 残 余 肾 单 位 的 高 滤 过 蛋 白 尿 ， 导 致 以 肾 小 球 硬 化 为 主 要 特 点 的 C R F 。   急 性 肾 损 伤 （ A K I ） 模 型 ： A K I 是 涉 及 多 学 科 的 临 床 常 见 危 重 病 ， 患 病 率 在 综 合 性 医 院 为 3 % ～ 1 0 % ， 在 重 症 监 护 室 为 3 0 % ～ 6 0 % ， 其 重 症 患 者 死 亡 率 高 达 3 0 % ～ 8 0 % ， 存 活 患 者 约 5 0 % 遗 留 永 久 性 肾 损 伤 ， 防 治 形 势 严 峻 。 建 立 稳 定 的 A K I 动 物 模 型 ， 是 早 期 发 现 和 早 期 防 治 等 肾 病 研 究 的 关 键 。   3 、 结 肠 炎 模 型 肠 胃 病 的 种 类 很 多 ， 包 括 ： 溃 疡 性 结 肠 炎 、 慢 性 肠 炎 、 胃 出 血 和 胃 穿 孔 等 ， 其 中 溃 疡 性 结 肠 炎 是 当 今 的 研 究 热 点 。 构 建 稳 定 的 溃 疡 性 结 肠 炎 动 物 模 型 ， 有 利 于 研 究 和 阐 述 目 前 病 因 不 明 确 的 溃 疡 性 结 肠 炎 发 病 机 制 和 治 疗 药 物 开 发 。   D S S 诱 导 小 鼠 溃 疡 性 结 肠 炎 模 型 ： 造 模 七 天 后 ， 小 鼠 结 肠 缩 短 、 肠 壁 增 厚 、 肠 黏 膜 充 血 、 局 部 出 血 、 可 见 明 显 溃 疡 面 ， 病 变 以 盲 肠 和 远 段 结 肠 为 显 著 。 H E 染 色 结 果 ， D S S 组 黏 膜 缺 失 ， 腺 体 多 数 不 完 整 ， 炎 症 细 胞 广 泛 浸 润 ， 呈 典 型 炎 症 改 变 。 体 重 变 化 ： 2 . 5 % D S S 诱 导 的 小 鼠 体 重 出 现 下 降 ， 小 鼠 食 欲 下 降 ， 活 动 欠 佳 。   4 、 关 节 炎 模 型 通 过 完 全 弗 氏 佐 剂 诱 导 关 节 炎 大 、 小 鼠 模 型 。 关 节 炎 （ a r t h r i t i s ） 泛 指 发 生 在 人 体 关 节 及 其 周 围 组 织 ， 由 炎 症 、 感 染 、 退 化 、 创 伤 或 其 他 因 素 引 起 的 炎 性 疾 病 ， 可 分 为 数 十 种 。   化 合 药 物 诱 导 型 关 节 炎 动 物 模 型 ， 造 模 方 法 具 有 简 便 易 行 ， 对 动 物 影 响 小 、 操 作 简 便 省 时 等 优 点 。 造 模 成 功 后 动 物 关 节 肿 胀 明 显 ， 其 表 现 接 近 于 人 类 关 节 炎 症 状 ， 且 造 模 过 程 简 单 ， 稳 定 ， 临 床 病 理 与 免 疫 学 改 变 类 似 于 人 类 关 节 炎 ， 是 较 为 理 想 的 关 节 炎 动 物 模 型 。   5 、 心 血 管 疾 病 模 型 冠 状 动 脉 结 扎 致 大 、 小 鼠 心 肌 缺 血 模 型 ， 包 括 急 性 心 肌 梗 死 、 慢 性 心 肌 梗 死 、 慢 性 心 力 衰 竭 及 心 肌 缺 血 再 灌 注 等 药 效 试 验 服 务 项 目 ， 主 要 包 括 造 模 、 药 效 试 验 、 药 效 评 价 等 。 了 解 详 情 自 噬 自 噬 是 细 胞 利 用 溶 酶 体 降 解 途 径 进 行 自 我 吞 食 的 过 程 ， 是 细 胞 在 营 养 不 足 等 压 力 情 况 下 维 持 生 存 的 主 要 代 谢 途 径 。 自 噬 主 要 分 为 三 类 ， 即 巨 自 噬 （ M a c r o a u t o p h a g y ） 、 微 自 噬 （ M i c r o a u t o p h a g y ） 、 分 子 伴 侣 介 导 的 自 噬 （ C h a p e r o n e m e d i a t e d a u t o p h a g y ） 。 自 噬 在 肿 瘤 、 神 经 退 行 性 疾 病 、 心 血 管 疾 病 等 多 种 疾 病 中 发 挥 重 要 作 用 。 自 噬 发 生 的 过 程 如 下 ： 　 　 图 一 自 噬 发 生 过 程 自 噬 产 品 介 绍 ： 1 . 自 噬 筛 选 系 统 ： G F P L C 3 W T / M T 、 G F P L C 3 R F P L C 3 M T 、 L u c i f e r a s e L C 3 W T / L u c i f e r a s e L C 3 M T 　 　 　 　 图 二 自 噬 筛 选 系 统 2 . 自 噬 检 测 系 统 ： 单 荧 光 L C 3 病 毒 ： p L e n t i C M V E G F P L C 3 P G K P u r o 、 p L e n t i U b c E G F P 3 F L A G L C 3 、 p L e n t i E F 1 a G F P L C 3 P G K P u r o 双 荧 光 L C 3 病 毒 ： A d V m C h e r r y G F P L C 3 （ 高 效 感 染 ） 、 L V m C h e r r y G F P L C 3 （ 稳 定 表 达 ） 、 A A V m C h e r r y G F P L C 3 （ 在 体 检 测 ） 、 W e s t e r n B l o t 检 测 L C 3 I / I I 、 p 6 2 ： 提 供 L C 3 、 p 6 2 （ 抗 体 检 测 ） 　 图 三 自 噬 检 测 系 统 3 . 自 噬 基 因 过 表 达 / 干 扰 慢 病 毒 ：  干 扰 慢 病 毒 、 3 个 靶 点 / 基 因 、 干 扰 效 率 7 0 % 以 上  过 表 达 慢 病 毒 、 真 核 表 达 载 体 O R F 克 隆 、 对 应 检 测 抗 体 　 　 图 四 自 噬 基 因 操 作 了 解 详 情 新 闻 中 心 申 请 试 用 和 元 李 记 官 网 又 悄 悄 上 新 ！ 新 增 巨 多 宝 藏 功 能 ， 你 发 现 几 个 ？ 2 0 2 4 . 0 3 . 2 2 为 更 好 地 宣 传 和 服 务 广 大 客 户 、 合 作 伙 伴 们 ， 和 元 李 记 官 网 v 3 . 0 版 本 正 式 上 线 啦 ！ 全 新 改 版 的 官 网 更 贴 合 “ 李 记 生 物 ” 品 牌 形 象 ， 能 够 全 方 位 、 多 元 化 展 示 本 司 产 品 与 专 业 技 术 ， 加 上 新 增 的 英 文 版 网 站 ， 海 量 信 息 汇 集 官 网 ， 方 便 各 位 更 加 深 入 地 了 解 李 记 生 物 。 奖 学 金 ｜ 顺 “ 李 ” 成 章 计 划 已 启 动 ， 龙 行 龘 龘 文 章 A C C E P T ！ 2 0 2 4 . 0 3 . 2 0 李 记 生 物 2 0 2 4 年 顺 “ 李 ” 成 章 奖 学 金 计 划 开 启 啦 ， 凡 在 发 表 文 献 中 注 明 使 用 李 记 生 物 产 品 且 影 响 因 子 符 合 条 件 即 可 和 元 李 记 与 慧 存 医 疗 达 成 深 度 战 略 合 作 ， 聚 力 促 进 生 物 样 本 存 储 高 质 量 发 展 2 0 2 4 . 0 2 . 2 2 2 0 2 4 年 2 月 2 2 日 ， 和 元 生 物 旗 下 控 股 子 公 司 和 元 李 记 （ 上 海 ） 生 物 技 术 有 限 公 司 （ 以 下 简 称 “ 和 元 李 记 ” ） 宣 布 与 上 海 慧 存 医 疗 科 技 有 限 公 司 （ 以 下 简 称 “ 慧 存 医 疗 ” ） 达 成 深 度 战 略 合 作 ， 双 方 就 组 织 、 细 胞 保 存 与 运 输 领 域 的 产 品 开 发 与 市 场 开 拓 达 成 高 度 一 致 ， 双 方 旨 在 加 快 生 物 样 本 储 运 领 域 产 品 创 新 ， 促 进 细 胞 与 基 因 治 疗 领 域 高 质 量 发 展 。 真 核 细 胞 转 染 试 剂 说 明 书 ， 高 效 转 染 试 剂 使 用 方 法 2 0 2 4 . 0 2 . 0 4 E Z T r a n s 细 胞 转 染 试 剂 作 为 新 一 代 的 转 染 试 剂 ， 其 转 染 原 理 是 带 正 电 的 阳 离 子 聚 合 物 与 核 酸 中 带 负 电 的 磷 酸 基 团 形 成 带 正 电 的 复 合 物 后 与 细 胞 表 面 带 负 电 的 蛋 白 多 糖 相 互 作 用 ， 并 通 过 胞 吞 作 用 进 入 细 胞 。 黑 胶 虫 产 生 的 原 因 有 哪 些 2 0 2 4 . 0 1 . 3 1 微 生 物 污 染 ： 黑 胶 虫 可 能 是 一 种 细 菌 、 真 菌 、 原 虫 等 微 生 物 。 在 实 验 室 中 ， 细 胞 培 养 物 可 能 受 到 环 境 中 微 生 物 的 污 染 ， 这 些 微 生 物 在 培 养 条 件 下 生 长 繁 殖 ， 形 成 黑 胶 虫 。 关 于 细 胞 冻 存 、 复 苏 步 骤 及 细 胞 冻 存 液 用 途 2 0 2 4 . 0 1 . 2 5 细 胞 冻 存 是 将 细 胞 放 在 低 温 环 境 ， 减 少 细 胞 代 谢 ， 以 便 长 期 储 存 的 一 种 技 术 ， 这 样 可 以 使 细 胞 暂 时 脱 离 生 长 状 态 而 将 其 细 胞 特 性 保 存 起 来 ， 以 便 需 要 的 时 候 再 复 苏 细 胞 用 于 实 验 。 更 多 新 闻 关 于 李 记 和 元 李 记 （ 上 海 ） 生 物 技 术 有 限 公 司 　 　 公 司 前 身 为 上 海 李 记 生 物 科 技 有 限 公 司 ， 成 立 于 2 0 1 5 年 。 和 元 李 记 在 2 0 2 3 年 由 和 元 生 物 （ 股 票 代 码 ： 6 8 8 2 3 8 ） 和 李 记 生 物 合 资 成 立 。 是 集 研 发 、 生 产 、 销 售 为 一 体 的 国 产 生 物 试 剂 公 司 ， 目 前 拥 有 多 名 复 旦 、 交 大 、 同 济 博 士 的 研 发 团 队 ， 和 一 支 年 轻 、 专 业 敢 拼 的 销 售 团 队 ， 以 及 在 全 国 4 0 余 座 城 市 铺 设 多 名 授 权 代 理 商 体 系 。 李 记 生 物 试 剂 ， 铸 造 百 年 经 典 ！ 我 们 将 不 断 致 力 于 生 物 实 验 试 剂 的 创 新 研 发 、 高 质 生 产 、 贴 心 服 务 ， 为 科 研 向 前 略 尽 绵 薄 之 力 ！ 查 看 更 多   6 0 0 + 自 主 产 品 7 0 0 + 发 表 S C I 5 0 0 0 + 服 务 客 户 1 0 0 0 0 + ㎡ 面 积 占 地 集 团 网 站 和 元 集 团 中 文 站 和 元 集 团 英 文 站 友 情 链 接 化 工 仪 器 网 丁 香 通 喀 斯 玛 科 研 采 购 管 理 平 台 锐 竞 采 购 平 台 虫 洞 空 间 方 元 互 联 试 剂 耗 材 采 购 管 理 平 台 联 系 方 式 电 话 ： 0 2 1 5 0 7 7 8 5 0 6 地 址 ： 上 海 市 浦 东 新 区 国 际 医 学 园 区 紫 萍 路 9 0 8 弄 2 7 号 楼 4 层 邮 箱 ： l s j 0 0 2 7 @ o b i o s h . c o m 扫 码 关 注 我 们 C o p y r i g h t © 2 0 1 5 2 0 2 4 和 元 李 记 （ 上 海 ） 生 物 技 术 有 限 公 司 A l l R i g h t s R e s e r v e d 沪 I C P 备 1 6 0 0 1 2 4 4 号 1 客 服 电 话 0 2 1 5 0 7 7 8 5 0 6 在 线 客 服 微 信 咨 询 申 请 试 用 回 到 顶 部

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